“scRNA-seq”到底有多少方法？

1、單細胞轉錄組建庫方法分類目前單細胞轉錄組的建庫方法基本可以按照技術方案分為兩類：1）一類依賴于孔板通俗的說，就是將已經解離的單個細胞分配到孔板中各自的孔中，在孔中單個細胞完成裂解、RNA富集、加細胞條碼(cellbarcode)和單分子識別碼(UMI)等步驟后再收集到一起進行測序。而具體的實施方案會根據每種建庫方案有一些特色型的變動。目前這一類方法包括CEL-seq、CEL-seq2、SMART-seq、SMART-seq2、Microwell-seq等。特點:a.基于孔...

什么是熒光定量PCR?

實時熒光定量PCR（Real-timeqPCR）是指在PCR反應中加入熒光基團，通過連續監測熒光信號出現的先后順序以及信號強弱的變化，即時分析目的基因的初始量的一種PCR技術。一、熒光化學物質Real-timeqPCR所使用熒光化學物質有熒光染料和熒光探針兩類。1、熒光染料目前主要使用的熒光染料是SYBRGreenI，SYBRGreenI是一種嵌入型花箐染料，在488nm（藍光）照射激發后，在522nm（綠光）具有發射高峰。SYBRGreenI是嵌在DNA螺旋的小溝里面的，一...

教你用熒光定量PCR儀？（ABI 7500）

打開電腦及儀器電源，雙擊電腦桌面上的7500software圖標打開程序。圖片來源：網絡軟件主界面：圖片來源：7500/7500FastReal-TimePCRSystemGETTINGSTARTEDGUIDE實驗設置：a.實驗名稱b.儀器型號c.實驗目的：定量、Genotyping(基因分型)、定性（有/無）d.定量類型：標準曲線、相對標準曲線、相對定量e.實驗方法：探針法、染料法f.模板類型：gDNA、cDNAg.Target設置：Target包括目的基因、內參基因（多少...

PCR技術之父-凱利·穆利斯

部分友友還是搞不清楚PCR是個什么東西，搞不清楚為什么可以進行基因擴增，這一節我們就了解一下穆利斯與PCR技術的發現與發展。一、PCR的提出和發展1983年春天的一個周五晚上，穆利斯開車帶著女友前往鄉間度周末。在蜿蜒的鄉間公路上開著車，一段DNA反復復制的景像，在他的腦海里冒了出來。事實上，DNA復制起始于DNA的解鏈，只需要通過加熱讓雙鏈DNA變為單鏈DNA，然后再添加和單鏈DNA末端相結合的引物DNA，這樣就開始了復制的過程，因此，只需要人為的給予其一些條件，就可以讓DN...

NanoDrop One/OneC的UV-Vis模塊檢測

UV-Vis檢測檢測原理UV-Vis應用檢測的波長范圍從190nm到850nm，可以檢測多達40個波長的吸收光，吸光度顯示在屏幕上，并納入檢測報告。此模塊功能可用于檢測未知樣品，確定最佳吸收波長，或者檢測擁有多個吸收峰的樣品。操作流程1、在“主頁”屏幕上，選擇用戶自定義選項卡，然后點擊UV-Vis；2、選定最多40個待監測波長（或者您也可以在檢測完成后，再選定波長），以及是否使用自動化光程調整、分析波長和基線矯正；3、吸取2μL空白對照溶液滴加到基座上，降下檢測臂（或將加入空...

POCT質譜的希望之旅

POCT質譜的希望之旅自POCT概念出現之后，其給予了所有分散式檢驗需求的用戶于充分的滿足，成為繼生化、免疫、分子診斷之后的第四個IVD賽道，并正在高速沖擊未來的IVD市場總量。POCT使得檢測工作從實驗室擴散到任何有需求的實地場景，這也使得靈敏度、準確度等一些指標被弱化，但在新冠和呼吸道疾病“盛行”中的防治過程中，其作用貢獻已遠超指標弱化帶來的問題。不僅如此，這些年分子POCT、質譜POCT及其他技術融合POCT產品井噴式出現，使得POCT的潛力進一步被發現，如果解決了大部...

PCR程序設置和什么有關？影響大么？

PCR程序設置和什么有關？影響大么？一旦確定了合適的DNA起始量和PCR組分，就必須設定PCR循環和運行參數，從而確保高效擴增。DNA聚合酶的特點、PCR緩沖液的類型、模板DNA的復雜程度都會影響反應條件的設置。1、起始高溫變性步驟在PCR起始階段，通常是在94–98℃下孵育1-3min將雙鏈DNA模板解離成單鏈，從而使引物可與目標區域結合并開始延伸。此步的高溫條件使起始DNA變性，確保在第一個擴增循環期間實現有效的目標序列擴增，此外也有助于使樣品中可能存在的熱不穩定性蛋白酶...

教你使用NanoDrop One

一、基本儀器操作1、NanoDropOne主頁屏幕2、NanoDropOne檢測屏幕3、NanoDropOne常規操作二、檢測核酸（雙鏈DNA、單鏈DNA或RNA）開始使用NanoDropOne儀器進行基座檢測之前，抬起儀器檢測臂然后清潔上下基座。至少需使用新的實驗室無塵紙擦拭基座。1.在“主頁”屏幕上，選擇核酸選項卡并點擊雙鏈DNA、單鏈DNA或RNA，根據要檢測的樣品而定。2.將1-2μL空白檢測溶液移取到下基座，然后降下檢測臂。3.點擊空白檢測并等待檢測完成。如果自動空...